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药师考试辅导:离子交换层析法

来源:233网校 2006年8月5日

(2)亲水性离子交换剂
亲水性离子交换剂中的基质为一类天然的或人工合成的化合物,与水亲和性较大,常用的有纤维素、交联葡聚糖及交联琼脂糖等。
①纤维素离子交换剂纤维素离子交换剂或称离子交换纤维素,是以微晶纤维素为基质,再引入电荷基团构成的。根据引入电荷基团的性质,也可分强酸性、弱酸性、强碱性及弱碱性离子交换剂。纤维素离子交换剂中,为广泛使用的是二乙胺基乙基(DEAE一)纤维素和羧甲基(CM一)纤维素。近年来Pharmacia公司用微晶纤维素经交联作用,制成了类似凝胶的珠状弱碱性离子交换剂(DEAE—Sephacel),结构与DEAE一纤维素相同,对蛋白质、核酸、激素及其他生物聚合物都有同等的分辨率。目前常用的纤维素交换剂如表6–1所示。离子交换纤维素适用于分离大分子多价电解质。它具有疏松的微结构,对生物高分子物质(如蛋白质和核酸分子)有较大的穿透性;表面积大,因而有较大的吸附容量。基质是亲水性的,避免了疏水性反应对蛋白质分离的干扰;电荷密度较低,与蛋白质分子结合不牢固,在温和洗脱条件下即可达到分离的目的,不会引起蛋白质的变性。但纤维素分子中只有一小部分羟基被取代,结合在其分子上的解离基团数量不多,故交换容量小,仅为交换树脂的1/10左右。
          表6–1离子交换纤维素

交换剂
(简写)类型功能基团交换容量
(毫克当量/g)时宜工作
pH
磷酸纤维素
(P-C)中强酸型阳离子交换剂—PO32-0.7~7.4Ph<4
磺酸乙级纤维素(SE-C)强酸型阳离子交换剂—(CH2)2SO3-0.2~0.3极低
羟甲基纤维素(CM-C)弱酸型阳离子交换剂—CH2COO-0.5~1.0pH>4
三乙基氨基乙基纤维素(TEAE-C)强碱型阴离子交换剂—(CH2)2N+(C2H5)30.5~1.0pH>8.6
二乙氨基乙基纤维素(DEAE-C)弱碱型阴离子交换剂—(CH2)2N+H(C2H5)20.1~1.0pH<8.6
氨基乙基纤维素(AE-C)中等碱型阴离子交换剂—(CH2)2N+H20.3~1.0
Ecteda纤维素(ECTE-C)中等碱型阴离子交换剂—(CH2)2N+(C2H4OH)30.3~0.5
②交联葡聚糖离子交换剂交联葡聚糖离子交换剂是以交联葡聚糖G–25和G–50为基质,通过化学方法引入电荷基团而制成的。其中交换剂G–50型适用于相对分子质量为3X104~3X106的物质的分离,交换剂G–25型能交换相对分子质量较小(1X103~5X103)的蛋白质。交联葡聚糖离子交换剂的性质与葡聚糖凝胶很相似,在强酸和强碱中不稳定,在pH=7时可耐120℃的高热。它既有离子交换作用,又有分子筛性质,可根据分子大小对生物高分子物质进行分级分离,但不适用于分级分离相对分子质量大于2×105的蛋白质。
③琼脂糖离子交换剂主要以交联琼脂糖CL–6B(SepharoseCL–6B)为基质,引入电荷基团而构成。这种离子交换凝胶对pH及温度的变化均较稳定,可在pH3~10和0~70℃范围内使用,改变离子强度或pH时,床体积变化不大。例如,DEAE–SepharoseCL–6B为阴离子交换剂;CM–SepharoseCL–6B为阳离子交换剂。它们的外形呈珠状,网孔大,特别适用于相对分子质量大的蛋白质和核酸等化合物的分离,即使加快流速,也不影响分辨率。
2.离子交换剂的应用选择
应用离子交换层析技术分离物质时,选择理想的离子交换剂是提高得率和分辨率的重要环节。任何一种离子交换剂都不可能适用于所有的样品物质的分离,因此必须根据各类离子交换剂的性质以及待分离物质的理化性质,选择一种理想的离子交换剂进行层析分离。选择离子交换剂的一般原则如下:
(1)选择阴离子抑或阳离子交换剂,决定于被分离物质所带的电荷性质。如果被分离物质带正电荷,应选择阳离子交换剂;如带负电荷,应选择阴离子交换剂;如被分离物为两性离子,则一般应根据其在稳定pH范围内所带电荷的性质来选择交换剂的种类。
(2)强型离子交换剂适用的pH范围很广,所以常用它来制备去离子水和分离一些在极端pH溶液中解离且较稳定的物质。弱型离子交换剂适用的pH范围狭窄,在pH为中性的溶液中交换容量高,用它分离生命大分子物质时,其活性不易丧失。
(3)离子交换剂处于电中性时常带有一定的反离子,使用时选择何种离子交换剂,取决于交换剂对各种反离子的结合力。为了提高交换容量,一般应选择结合力较小的反离子。据此,强酸型和强碱型离子交换剂应分别选择H型和OH型;弱酸型和弱碱型交换剂应分别选择Na型和C1型。
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