è�¯å¸ˆè€ƒè¯•辅导:离å�交æ�¢å±‚æž�法
æ�¥æº�:233ç½‘æ ¡ 2006å¹´8月5æ—¥
(2)亲水性离å�交æ�¢å‰‚
亲水性离å�交æ�¢å‰‚ä¸çš„基质为一类天然的或人工å�ˆæˆ�的化å�ˆç‰©ï¼Œä¸Žæ°´äº²å’Œæ€§è¾ƒå¤§ï¼Œå¸¸ç”¨çš„æœ‰çº¤ç»´ç´ ã€�交è�”è‘¡è�šç³–å�Šäº¤è�”ç�¼è„‚ç³–ç‰ã€‚
â‘ çº¤ç»´ç´ ç¦»å�交æ�¢å‰‚çº¤ç»´ç´ ç¦»å�交æ�¢å‰‚或称离å�交æ�¢çº¤ç»´ç´ ï¼Œæ˜¯ä»¥å¾®æ™¶çº¤ç»´ç´ ä¸ºåŸºè´¨ï¼Œå†�引入电è�·åŸºå›¢æž„æˆ�çš„ã€‚æ ¹æ�®å¼•入电è�·åŸºå›¢çš„æ€§è´¨ï¼Œä¹Ÿå�¯åˆ†å¼ºé…¸æ€§ã€�弱酸性ã€�强碱性å�Šå¼±ç¢±æ€§ç¦»å�交æ�¢å‰‚ã€‚çº¤ç»´ç´ ç¦»å�交æ�¢å‰‚ä¸ï¼Œä¸ºå¹¿æ³›ä½¿ç”¨çš„æ˜¯äºŒä¹™èƒºåŸºä¹™åŸº(DEAE一)çº¤ç»´ç´ å’Œç¾§ç”²åŸº(CM一)çº¤ç»´ç´ ã€‚è¿‘å¹´æ�¥Pharmaciaå…¬å�¸ç”¨å¾®æ™¶çº¤ç»´ç´ ç»�交è�”作用,制æˆ�了类似å‡�胶的ç� 状弱碱性离å�交æ�¢å‰‚(DEAE—Sephacel),结构与DEAEä¸€çº¤ç»´ç´ ç›¸å�Œï¼Œå¯¹è›‹ç™½è´¨ã€�æ ¸é…¸ã€�æ¿€ç´ å�Šå…¶ä»–生物è�šå�ˆç‰©éƒ½æœ‰å�Œç‰çš„分辨率。目å‰�å¸¸ç”¨çš„çº¤ç»´ç´ äº¤æ�¢å‰‚如表6–1所示。离å�交æ�¢çº¤ç»´ç´ 适用于分离大分å�多价电解质。它具有ç–�æ�¾çš„微结构,对生物高分å�物质(å¦‚è›‹ç™½è´¨å’Œæ ¸é…¸åˆ†å�)有较大的穿é€�性;表é�¢ç§¯å¤§ï¼Œå› 而有较大的å�¸é™„容é‡�。基质是亲水性的,é�¿å…�了ç–�水性å��应对蛋白质分离的干扰;电è�·å¯†åº¦è¾ƒä½Žï¼Œä¸Žè›‹ç™½è´¨åˆ†å�结å�ˆä¸�牢固,在温和洗脱æ�¡ä»¶ä¸‹å�³å�¯è¾¾åˆ°åˆ†ç¦»çš„目的,ä¸�会引起蛋白质的å�˜æ€§ã€‚ä½†çº¤ç»´ç´ åˆ†å�ä¸å�ªæœ‰ä¸€å°�部分羟基被å�–代,结å�ˆåœ¨å…¶åˆ†å�上的解离基团数é‡�ä¸�多,故交æ�¢å®¹é‡�å°�,仅为交æ�¢æ ‘è„‚çš„1ï¼�10å·¦å�³ã€‚
          表6–1离å�交æ�¢çº¤ç»´ç´
交�剂
(简写)类型功能基团交�容�
(毫克当�/g)时宜工作
pH
磷酸纤维ç´
(P-C)ä¸å¼ºé…¸åž‹é˜³ç¦»å�交æ�¢å‰‚—PO32-0.7~7.4Ph<4
ç£ºé…¸ä¹™çº§çº¤ç»´ç´ ï¼ˆSE-C)强酸型阳离å�交æ�¢å‰‚—(CH2)2SO3-0.2~0.3æž�低
ç¾Ÿç”²åŸºçº¤ç»´ç´ ï¼ˆCM-C)弱酸型阳离å�交æ�¢å‰‚—CH2COO-0.5~1.0pH>4
ä¸‰ä¹™åŸºæ°¨åŸºä¹™åŸºçº¤ç»´ç´ ï¼ˆTEAE-C)强碱型阴离å�交æ�¢å‰‚—(CH2)2N+(C2H5)30.5~1.0pH>8.6
äºŒä¹™æ°¨åŸºä¹™åŸºçº¤ç»´ç´ ï¼ˆDEAE-C)弱碱型阴离å�交æ�¢å‰‚—(CH2)2N+H(C2H5)20.1~1.0pH<8.6
æ°¨åŸºä¹™åŸºçº¤ç»´ç´ ï¼ˆAE-C)ä¸ç‰ç¢±åž‹é˜´ç¦»å�交æ�¢å‰‚—(CH2)2N+H20.3~1.0
Ectedaçº¤ç»´ç´ ï¼ˆECTE-C)ä¸ç‰ç¢±åž‹é˜´ç¦»å�交æ�¢å‰‚—(CH2)2N+(C2H4OH)30.3~0.5
②交è�”è‘¡è�šç³–离å�交æ�¢å‰‚交è�”è‘¡è�šç³–离å�交æ�¢å‰‚是以交è�”è‘¡è�šç³–G–25å’ŒG–50ä¸ºåŸºè´¨ï¼Œé€šè¿‡åŒ–å¦æ–¹æ³•引入电è�·åŸºå›¢è€Œåˆ¶æˆ�的。其ä¸äº¤æ�¢å‰‚G–50型适用于相对分å�è´¨é‡�为3X104~3X106的物质的分离,交æ�¢å‰‚G–25型能交æ�¢ç›¸å¯¹åˆ†å�è´¨é‡�较å°�(1X103~5X103)的蛋白质。交è�”è‘¡è�šç³–离å�交æ�¢å‰‚的性质与葡è�šç³–å‡�胶很相似,在强酸和强碱ä¸ä¸�稳定,在pHï¼�7æ—¶å�¯è€�120℃的高çƒã€‚它既有离å�交æ�¢ä½œç”¨ï¼Œå�ˆæœ‰åˆ†å�ç›æ€§è´¨ï¼Œå�¯æ ¹æ�®åˆ†å�大å°�对生物高分å�物质进行分级分离,但ä¸�适用于分级分离相对分å�è´¨é‡�大于2×105的蛋白质。
â‘¢ç�¼è„‚糖离å�交æ�¢å‰‚主è¦�以交è�”ç�¼è„‚ç³–CL–6B(SepharoseCL–6B)为基质,引入电è�·åŸºå›¢è€Œæž„æˆ�。这ç§�离å�交æ�¢å‡�胶对pHå�Šæ¸©åº¦çš„å�˜åŒ–å�‡è¾ƒç¨³å®šï¼Œå�¯åœ¨pH3~10å’Œ0~70℃范围内使用,改å�˜ç¦»å�强度或pH时,床体积å�˜åŒ–ä¸�大。例如,DEAE–SepharoseCL–6B为阴离å�交æ�¢å‰‚ï¼›CM–SepharoseCL–6B为阳离å�交æ�¢å‰‚。它们的外形呈ç� 状,网å”大,特别适用于相对分å�è´¨é‡�å¤§çš„è›‹ç™½è´¨å’Œæ ¸é…¸ç‰åŒ–å�ˆç‰©çš„分离,å�³ä½¿åŠ å¿«æµ�速,也ä¸�å½±å“�分辨率。
2.离å�交æ�¢å‰‚的应用选择
应用离å�交æ�¢å±‚æž�技术分离物质时,选择ç�†æƒ³çš„离å�交æ�¢å‰‚是æ��高得率和分辨率的é‡�è¦�环节。任何一ç§�离å�交æ�¢å‰‚都ä¸�å�¯èƒ½é€‚ç”¨äºŽæ‰€æœ‰çš„æ ·å“�ç‰©è´¨çš„åˆ†ç¦»ï¼Œå› æ¤å¿…é¡»æ ¹æ�®å�„类离å�交æ�¢å‰‚的性质以å�Šå¾…分离物质的ç�†åŒ–性质,选择一ç§�ç�†æƒ³çš„离å�交æ�¢å‰‚进行层æž�分离。选择离å�交æ�¢å‰‚的一般原则如下:
(1)选择阴离å�抑或阳离å�交æ�¢å‰‚,决定于被分离物质所带的电è�·æ€§è´¨ã€‚如果被分离物质带æ£ç”µè�·ï¼Œåº”选择阳离å�交æ�¢å‰‚;如带负电è�·ï¼Œåº”选择阴离å�交æ�¢å‰‚;如被分离物为两性离å�ï¼Œåˆ™ä¸€èˆ¬åº”æ ¹æ�®å…¶åœ¨ç¨³å®špH范围内所带电è�·çš„æ€§è´¨æ�¥é€‰æ‹©äº¤æ�¢å‰‚çš„ç§�类。
(2)强型离å�交æ�¢å‰‚适用的pH范围很广,所以常用它æ�¥åˆ¶å¤‡åŽ»ç¦»å�水和分离一些在æž�端pH溶液ä¸è§£ç¦»ä¸”较稳定的物质。弱型离å�交æ�¢å‰‚适用的pH范围ç‹çª„,在pHä¸ºä¸æ€§çš„æº¶æ¶²ä¸äº¤æ�¢å®¹é‡�高,用它分离生命大分å�物质时,其活性ä¸�易丧失。
(3)离å�交æ�¢å‰‚å¤„äºŽç”µä¸æ€§æ—¶å¸¸å¸¦æœ‰ä¸€å®šçš„å��离å�,使用时选择何ç§�离å�交æ�¢å‰‚,å�–决于交æ�¢å‰‚对å�„ç§�å��离å�的结å�ˆåŠ›ã€‚ä¸ºäº†æ��高交æ�¢å®¹é‡�,一般应选择结å�ˆåŠ›è¾ƒå°�çš„å��离å�。æ�®æ¤ï¼Œå¼ºé…¸åž‹å’Œå¼ºç¢±åž‹ç¦»å�交æ�¢å‰‚应分别选择H型和OH型;弱酸型和弱碱型交æ�¢å‰‚应分别选择Na型和C1型。
责编:jhdxy
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