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�师考试辅导:离�交�层�法

��:233网校 2006年8月5日

(2)亲水性离�交�剂
亲水性离�交�剂中的基质为一类天然的或人工��的化�物,与水亲和性较大,常用的有纤维素�交�葡�糖�交��脂糖等。
①纤维素离�交�剂纤维素离�交�剂或称离�交�纤维素,是以微晶纤维素为基质,�引入电�基团构�的。根�引入电�基团的性质,也�分强酸性�弱酸性�强碱性�弱碱性离�交�剂。纤维素离�交�剂中,为广泛使用的是二乙胺基乙基(DEAE一)纤维素和羧甲基(CM一)纤维素。近年�Pharmacia公�用微晶纤维素�交�作用,制�了类似�胶的�状弱碱性离�交�剂(DEAE—Sephacel),结构与DEAE一纤维素相�,对蛋白质�核酸�激素�其他生物��物都有�等的分辨率。目�常用的纤维素交�剂如表6–1所示。离�交�纤维素适用于分离大分�多价电解质。它具有��的微结构,对生物高分�物质(如蛋白质和核酸分�)有较大的穿�性;表�积大,因而有较大的�附容�。基质是亲水性的,��了�水性�应对蛋白质分离的干扰;电�密度较低,与蛋白质分�结��牢固,在温和洗脱�件下��达到分离的目的,�会引起蛋白质的�性。但纤维素分�中�有一�部分羟基被�代,结�在其分�上的解离基团数��多,故交�容��,仅为交�树脂的1�10左�。
          表6–1离�交�纤维素

交�剂
(简写)类型功能基团交�容�
(毫克当�/g)时宜工作
pH
磷酸纤维素
(P-C)中强酸型阳离�交�剂—PO32-0.7~7.4Ph<4
磺酸乙级纤维素(SE-C)强酸型阳离�交�剂—(CH2)2SO3-0.2~0.3�低
羟甲基纤维素(CM-C)弱酸型阳离�交�剂—CH2COO-0.5~1.0pH>4
三乙基氨基乙基纤维素(TEAE-C)强碱型阴离�交�剂—(CH2)2N+(C2H5)30.5~1.0pH>8.6
二乙氨基乙基纤维素(DEAE-C)弱碱型阴离�交�剂—(CH2)2N+H(C2H5)20.1~1.0pH<8.6
氨基乙基纤维素(AE-C)中等碱型阴离�交�剂—(CH2)2N+H20.3~1.0
Ecteda纤维素(ECTE-C)中等碱型阴离�交�剂—(CH2)2N+(C2H4OH)30.3~0.5
②交�葡�糖离�交�剂交�葡�糖离�交�剂是以交�葡�糖G–25和G–50为基质,通过化学方法引入电�基团而制�的。其中交�剂G–50型适用于相对分�质�为3X104~3X106的物质的分离,交�剂G–25型能交�相对分�质�较�(1X103~5X103)的蛋白质。交�葡�糖离�交�剂的性质与葡�糖�胶很相似,在强酸和强碱中�稳定,在pH�7时��120℃的高热。它既有离�交�作用,�有分�筛性质,�根�分�大�对生物高分�物质进行分级分离,但�适用于分级分离相对分�质�大于2×105的蛋白质。
③�脂糖离�交�剂主�以交��脂糖CL–6B(SepharoseCL–6B)为基质,引入电�基团而构�。这�离�交��胶对pH�温度的�化�较稳定,�在pH3~10和0~70℃范围内使用,改�离�强度或pH时,床体积�化�大。例如,DEAE–SepharoseCL–6B为阴离�交�剂;CM–SepharoseCL–6B为阳离�交�剂。它们的外形呈�状,网孔大,特别适用于相对分�质�大的蛋白质和核酸等化�物的分离,�使加快�速,也�影�分辨率。
2.离�交�剂的应用选择
应用离�交�层�技术分离物质时,选择�想的离�交�剂是�高得率和分辨率的��环节。任何一�离�交�剂都��能适用于所有的样�物质的分离,因此必须根��类离�交�剂的性质以�待分离物质的�化性质,选择一��想的离�交�剂进行层�分离。选择离�交�剂的一般原则如下:
(1)选择阴离�抑或阳离�交�剂,决定于被分离物质所带的电�性质。如果被分离物质带正电�,应选择阳离�交�剂;如带负电�,应选择阴离�交�剂;如被分离物为两性离�,则一般应根�其在稳定pH范围内所带电�的性质�选择交�剂的�类。
(2)强型离�交�剂适用的pH范围很广,所以常用它�制备去离�水和分离一些在�端pH溶液中解离且较稳定的物质。弱型离�交�剂适用的pH范围狭窄,在pH为中性的溶液中交�容�高,用它分离生命大分�物质时,其活性�易丧失。
(3)离�交�剂处于电中性时常带有一定的�离�,使用时选择何�离�交�剂,�决于交�剂对���离�的结�力。为了�高交�容�,一般应选择结�力较�的�离�。�此,强酸型和强碱型离�交�剂应分别选择H型和OH型;弱酸型和弱碱型交�剂应分别选择Na型和C1型。
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