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　　(三) 速率理论 Van Deemter方程，范氏方程：H = A + B/u + Cu

　　A为涡流扩散项，B为纵向扩散系数，C为传质阻抗项

　　HPLC中范式方程简化为： H = A + Cu

　　二、高效液相色谱仪

　　(一)仪器的基本结构

　　高压输液泵、色谱柱、进样阀、检测器

　　(二)检测器的类型和适用范围

　　1. 选择性检测器：也称浓度型检测器，包括紫外检测器、光二极管阵列检测器DAD、荧光检测器、电化学检测器和质谱检测器。

　　(1)紫外检测器：常用。适于有共轭结构的化合物如芳香化合物、核酸及甾体激素等。

　　(2)光二极管阵列检测器 diode-array detector, DAD

　　(3)荧光检测器：仅适用于在流动相条件下具有荧光或经衍生转化为具有荧光的化合物

　　(4)电化学检测器： 仅适用于在流动相条件下可发生氧化-还原反应的化合物的检测。

　　(5)质谱检测器：主要应用于大分子物质的检测，如蛋白质、多肽等，以及色谱峰的纯度或原料药中的杂质检查。

　　2. 通用型检测器：也称质量型检测器，包括示差折光检测器和蒸发光散射检测器(ELSD)。

　　ELSD 仅适用于UV检测困难的物质的分析，如糖类和脂质等，以及药物杂质的确认。

　　三、液固吸附色谱法 LSC

　　l 分离原理：按被分离组分的分子(溶质分子)与流动相分子(溶剂分子)争夺吸附剂表面活性中心的吸附能力的差别而分离。

　　l 硅胶为吸附色谱法常用的固定相。

　　四、液液分配色谱法 LLC

　　(一)正相分配色谱法：流动相极性<固定相极性。

　　主要用于分离溶于有机溶剂的极性及中等极性的分子型物质。

　　反相分配色谱法：流动相极性>固定相极性。主要用于分离非极性至中等极性物质。

　　(二)LLC的固定相 常用的固定相是化学健合相。

　　(1)非极性健合相：十八烷基硅烷健合硅胶(ODS，C18)、辛基硅烷健合硅胶(C8)，在反相HPLC中为常用。

　　(2)极性健合相：常用氨基和氰基硅烷键合相，即可用于正相色谱法，也可用于反相色谱法。多用于正相HPLC。

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